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纳豆菌检测法

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2014/07/28 15:12
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【摘要】:
1.纳豆菌分离法实验器材:白金耳、棉签、试管、无菌浅底盘(直径9公分)、无菌移液管(容量1ml)试药:无菌水、普通寒天培养基(nutrientagar,Difco公司生产)方法:成品纳豆中的分离1)划线分离法①用白金耳取纳豆表面的粘丝,置于10ml的无菌水中,搅拌②将上述试液注入2个放有普通寒天培养基的浅底盘中,用粘有纳豆粘液浮游液的白金耳划线,在30度温度下培养24-48小时③出现独立的菌落后挑

1.纳豆菌分离法

实验器材:白金耳、棉签、试管、无菌浅底盘(直径9公分)、无菌移液管(容量1ml)

试药:无菌水、普通寒天培养基(nutrient agar,Difco公司生产)

方法:成品纳豆中的分离

1)划线分离法

①用白金耳取纳豆表面的粘丝,置于10ml的无菌水中,搅拌

②将上述试液注入2个放有普通寒天培养基的浅底盘中,用粘有纳豆粘液浮游液的白金耳划线,在30度温度下培养24-48小时

③出现独立的菌落后挑取之,分离完毕

2)稀释分离法

①准备无菌浅底盘3个,将1-2ml的无菌水分别注入3个浅底盘中

②将粘有纳豆粘液浮游液的白金耳放入第1个浅底盘中搅拌,随后以同样的方法将白金耳移入第2个及第3个浅底盘中搅拌

③加入预先溶解并微微冷却(55度左右)的普通寒天培养基10ml并搅拌之,在30度温度下培养24-48小时

④出现独立的菌落后挑取之,分离完毕

2.生菌数测定法

实验器材:棉签、稀释用的试管、无菌浅底盘(直径9公分)、无菌移液管(容量1ml)、无菌烧杯(容量300ml)、玻璃棒、菌落计数器

试药:无菌水、普通寒天培养基(nutrient agar,Difco公司生产)

实验方法:

①将成品纳豆1包(50克)置于无菌水100ml中搅拌,以此作为原液

②原液1ml中纳豆菌约为1×1010/ml,用无菌水进行阶段性稀释,稀释液中细菌数最终调制到100个/ml左右

③将稀释液按1、0.1、0.01ml的3个阶段注入浅底盘中,加入溶解并微微冷却(55度左右)的普通寒天培养基10ml并搅拌之后做平板培养

④对在30度温度下培养24-48小时后出现的独立的菌落用菌落计数器进行计数,统计原液的生菌数目

3.杂菌试验法

序言:成品纳豆或是因发酵不成功而未成成品的纳豆,其杂菌实验一般也采用生菌数测定法。一般而言,与生菌数测定法同样的进行稀释分离后,出现的几乎全部为纳豆菌,杂菌几乎不出现。这是因为即使在发酵不成功的纳豆中,纳豆菌的数量也是处于压倒性的地位。因此,本实验将用未稀释的原液(参照生菌数测定法)来测定杂菌数目。

实验器材:棉签、稀释用的试管、无菌浅底盘(直径9公分)、无菌移液管(容量1ml)、无菌烧杯(容量300ml)、菌落计数器

试药:无菌水、普通寒天培养基(nutrient agar,Difco公司生产)

实验方法:

①将成品纳豆1包(50)克置于无菌水100ml中搅拌,以此作为原液

②将稀释液按1、0.1、0.01ml的3个阶段注入浅底盘中,加入溶解并微微冷却(55度左右)的普通寒天培养基10ml并搅拌之后做平板培养

③在30度温度下培养24-48小时后,纳豆菌中将出现杂菌的群落。用40倍的显微镜进行观察,并用菌落计数器进行计数,统计原液中的杂菌数目

4.纳豆菌的简易同定法

序言:纳豆菌属Bacillus subitilis,在细菌学上对纳豆菌及枯草菌进行区分是非常困难的。另外,即使在细菌学上能够区分,但如果该细菌不能生成纳豆,则就不能称其为纳豆菌。因此,为了在从事纳豆生产时能挑选到有效的纳豆菌种,这里简单叙述一下纳豆菌的简易同定法。

实验器材:白金耳、无菌浅底盘(直径9公分)、无菌移液管(容量1ml)、

试药:无菌水、普通寒天培养基(nutrient agar,Difco公司生产)

方法:

1)菌落识别法

培养24小时后的纳豆菌菌落(参照纳豆菌分离法),为白色圆形,表面呈皱纹状。在40倍的显微镜下观察菌落的周边,可以看出有细菊花状到织毛状的凸凹。

2)噬菌体识别法

纳豆菌的噬菌体只侵害纳豆菌,利用这一特点可以简易的确认纳豆菌。将需鉴定的菌种培养72小时后用白金耳挑取,置于无菌浅底盘中。加入溶解并冷却的普通寒天培养基10ml,搅拌后做平板培养基。培养基固定后,其表面用纳豆菌噬菌体划线,在30度温度下培养12-24小时。划线部分如果透明,则是因为噬菌体噬食纳豆菌之故,可以认定该菌种为纳豆菌。

3)培养基上粘液生成物识别法

纳豆菌在蒸煮大豆上生长,将产生大量的粘液物质。利用该特点可将纳豆菌与其他菌种进行区别。在此叙述比蒸煮大豆更简单的粘液培养基识别法(GSP)。培养基的组成为1.5%谷氨酸钠水混合物,3%蔗糖,1.5% Phyton(BBL公司生产),0.25%KH2PO4,0.17%Na2HPO4,0.05%NaCl,0.05%MgCL2·7H2O,100ug/L生物素pH7.0。GSP培养基与菌种接种,在37度温度下培养24小时。用白金耳挑取形成后的菌落。有粘丝者可认为是纳豆菌。

5.纳豆菌的保存

纳豆菌为胞子形成菌,与其他细菌相比,易于保存。但该保存只是与细菌的生存有关,与纳豆的生产性无关。

最简单的方法是将纳豆菌放置于普通寒天斜面培养基之上,保持干燥状态,可保存数年之久。另外还有,①普通寒天斜面上培养3天,几成胞子状的菌落用白金耳取出,置于试管中,放入无菌蒸馏水中,在20度温度下保存;②普通寒天斜面培养基上做无菌流动的重层法;③冻结干燥法,等。