1.纳豆菌分离法

实验器材：白金耳、棉签、试管、无菌浅底盘(直径9公分)、无菌移液管(容量1ml)

试药：无菌水、普通寒天培养基(nutrient agar，Difco公司生产)

方法：成品纳豆中的分离

1)划线分离法

①用白金耳取纳豆表面的粘丝，置于10ml的无菌水中，搅拌

②将上述试液注入2个放有普通寒天培养基的浅底盘中，用粘有纳豆粘液浮游液的白金耳划线，在30度温度下培养24-48小时

③出现独立的菌落后挑取之，分离完毕

2)稀释分离法

①准备无菌浅底盘3个，将1-2ml的无菌水分别注入3个浅底盘中

②将粘有纳豆粘液浮游液的白金耳放入第1个浅底盘中搅拌，随后以同样的方法将白金耳移入第2个及第3个浅底盘中搅拌

③加入预先溶解并微微冷却(55度左右)的普通寒天培养基10ml并搅拌之,在30度温度下培养24-48小时

④出现独立的菌落后挑取之，分离完毕

2.生菌数测定法

实验器材：棉签、稀释用的试管、无菌浅底盘(直径9公分)、无菌移液管(容量1ml)、无菌烧杯(容量300ml)、玻璃棒、菌落计数器

试药：无菌水、普通寒天培养基(nutrient agar，Difco公司生产)

实验方法：

①将成品纳豆1包(50克)置于无菌水100ml中搅拌，以此作为原液

②原液1ml中纳豆菌约为1×1010/ml，用无菌水进行阶段性稀释，稀释液中细菌数最终调制到100个/ml左右

③将稀释液按1、0.1、0.01ml的3个阶段注入浅底盘中，加入溶解并微微冷却(55度左右)的普通寒天培养基10ml并搅拌之后做平板培养

④对在30度温度下培养24-48小时后出现的独立的菌落用菌落计数器进行计数，统计原液的生菌数目

3.杂菌试验法

序言：成品纳豆或是因发酵不成功而未成成品的纳豆，其杂菌实验一般也采用生菌数测定法。一般而言，与生菌数测定法同样的进行稀释分离后，出现的几乎全部为纳豆菌，杂菌几乎不出现。这是因为即使在发酵不成功的纳豆中，纳豆菌的数量也是处于压倒性的地位。因此，本实验将用未稀释的原液(参照生菌数测定法)来测定杂菌数目。

实验器材：棉签、稀释用的试管、无菌浅底盘(直径9公分)、无菌移液管(容量1ml)、无菌烧杯(容量300ml)、菌落计数器

试药：无菌水、普通寒天培养基(nutrient agar，Difco公司生产)

实验方法：

①将成品纳豆1包(50)克置于无菌水100ml中搅拌，以此作为原液

②将稀释液按1、0.1、0.01ml的3个阶段注入浅底盘中，加入溶解并微微冷却(55度左右)的普通寒天培养基10ml并搅拌之后做平板培养

③在30度温度下培养24-48小时后，纳豆菌中将出现杂菌的群落。用40倍的显微镜进行观察，并用菌落计数器进行计数，统计原液中的杂菌数目

4.纳豆菌的简易同定法

序言：纳豆菌属Bacillus subitilis，在细菌学上对纳豆菌及枯草菌进行区分是非常困难的。另外，即使在细菌学上能够区分，但如果该细菌不能生成纳豆，则就不能称其为纳豆菌。因此，为了在从事纳豆生产时能挑选到有效的纳豆菌种，这里简单叙述一下纳豆菌的简易同定法。

实验器材：白金耳、无菌浅底盘(直径9公分)、无菌移液管(容量1ml)、

试药：无菌水、普通寒天培养基(nutrient agar，Difco公司生产)

方法：

1)菌落识别法

培养24小时后的纳豆菌菌落(参照纳豆菌分离法)，为白色圆形，表面呈皱纹状。在40倍的显微镜下观察菌落的周边，可以看出有细菊花状到织毛状的凸凹。

2)噬菌体识别法

纳豆菌的噬菌体只侵害纳豆菌，利用这一特点可以简易的确认纳豆菌。将需鉴定的菌种培养72小时后用白金耳挑取，置于无菌浅底盘中。加入溶解并冷却的普通寒天培养基10ml，搅拌后做平板培养基。培养基固定后，其表面用纳豆菌噬菌体划线，在30度温度下培养12-24小时。划线部分如果透明，则是因为噬菌体噬食纳豆菌之故，可以认定该菌种为纳豆菌。

3)培养基上粘液生成物识别法

纳豆菌在蒸煮大豆上生长，将产生大量的粘液物质。利用该特点可将纳豆菌与其他菌种进行区别。在此叙述比蒸煮大豆更简单的粘液培养基识别法(GSP)。培养基的组成为1.5%谷氨酸钠水混合物，3%蔗糖，1.5% Phyton(BBL公司生产)，0.25%KH2PO4，0.17%Na2HPO4，0.05%NaCl，0.05%MgCL2·7H2O，100ug/L生物素pH7.0。GSP培养基与菌种接种，在37度温度下培养24小时。用白金耳挑取形成后的菌落。有粘丝者可认为是纳豆菌。

5.纳豆菌的保存

纳豆菌为胞子形成菌，与其他细菌相比，易于保存。但该保存只是与细菌的生存有关，与纳豆的生产性无关。

最简单的方法是将纳豆菌放置于普通寒天斜面培养基之上，保持干燥状态，可保存数年之久。另外还有，①普通寒天斜面上培养3天，几成胞子状的菌落用白金耳取出，置于试管中，放入无菌蒸馏水中，在20度温度下保存;②普通寒天斜面培养基上做无菌流动的重层法;③冻结干燥法，等。