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纳豆激酶检测
发布时间:
2014-07-28 15:16
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操作程序1-1).制作生理盐水缓冲液准备鹏酸和鹏酸钠。鹏酸属酸性,鹏酸钠属碱性。制作0.5ml的鹏酸生理盐水和0.5ml的鹏酸钠生理盐水。将ph值调整到7.8。1-2).加入纤维蛋白原准备纤维蛋白原。将纤维蛋白原以0.4%的比例添加到已准备好的缓冲液中。此时必须注意的是0.4%的添加比例。纤维蛋白原没有100%的纯品。0.4%是纯品的换算值。一般在标签上会标明浓度。如果浓度为50%,则纤维蛋白原按
操作程序
1-1).制作生理盐水缓冲液
准备鹏酸和鹏酸钠。
鹏酸属酸性,鹏酸钠属碱性。
制作0.5ml的鹏酸生理盐水和0.5ml的鹏酸钠生理盐水。将ph值调整到7.8。
1-2).加入纤维蛋白原
准备纤维蛋白原。
将纤维蛋白原以0.4%的比例添加到已准备好的缓冲液中。
此时必须注意的是0.4%的添加比例。
纤维蛋白原没有100%的纯品。
0.4%是纯品的换算值。
一般在标签上会标明浓度。
如果浓度为50%,则纤维蛋白原按0.8%的比例添加;
如果浓度为80%,则纤维蛋白原按0.5%的比例添加。
1-3).制作牛凝血酶溶液
准备牛凝血酶
将50U的牛凝血酶放入1ml的生理盐水中溶解
1-4).制作plate
将(1-2)中所做的缓冲液10ml注入玻璃容器中。再将已制成的牛凝血酶0.5ml注入容器,搅拌凝固。这一步的操作手法如果不好的话,在均匀地混合搅拌以前就会凝固。另外,搅拌中如果混入杂质也不容易溶解。
(注:在容器中操作如果有困难的话,可以在试管中混合、搅拌;或是在废弃的注射器中混合、搅拌)
2-1)incubate
制作纳豆激酶溶液。
如果仅仅只是测试有无活性,则浓度多少随意。
如果是以鸟激酶为指标作对比实验,则需严格控制浓度。
纳豆激酶溶液每10μl 测定点位。
spotting后的容器在37度常温下incubate
(使用孵化器也可)
2-2)测定面积
纤维蛋白在溶解后会形成圆形物。
在2小时以后、4小时以后、24小时以后测量圆的面积。